Western及IP細胞裂解液

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Western及IP細胞裂解液

產品簡介

WIP組織細胞裂解液（Tissue and Cell lysis solution for Western Blot and Immunoprecipitation ），是一種在非變性條件下裂解細胞的裂解液。本產品裂解細胞獲得的裂解產物，可用于PAGE，蛋白印跡（Western Blot），免疫沉淀（immnolprecipitation，IP）,免疫共沉淀（co-IP） 和蛋白與多肽的分離純化。

WIP裂解液的主要成分為Tris（pH 7.5，20mM），150mM NaCl，去垢劑Triton X-100以及多種蛋白酶抑制劑,無需自備PMSF、磷酸酶抑制劑等蛋白酶抑制劑。WIP不僅可以用于細胞培養物的裂解，也可直接用于大多數動物組織的裂解。在有效地裂解組織和細胞的同時，可強烈地抑制蛋白、多肽的降解，并保持原有的分子結構和蛋白間相互作用。

用WIP裂解得到的組織細胞蛋白樣品，可以用博奧森生產的BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度。由于含有較高濃度的Triton X-100等干擾物質，不能用Bradford試劑盒測定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。

包裝清單

WIP組織細胞裂解液        30ml

PMSF（100X）             0.3ml

保存條件：

-20°C保存，一年有效。

注意事項：

1．為獲得最佳的實驗效果，可適當分裝使用，以盡量避免反復凍融。

2．PMSF應現用現加。

3．裂解蛋白的所有步驟都需在冰上或4°C進行。

4．蛋白酶抑制劑均有較高的毒性，為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。一旦直接接觸，請立即用流水沖洗，再向醫療保健結構咨詢。

二.使用方法說明

1．培養細胞

取出WIP裂解液，待融化后，顛倒混勻數次，適量分裝凍存。在使用前取出，按比例加入PMSF（使其最終濃度為1mM），混勻，立即使用。

貼壁細胞，去除培養液，用PBS、生理鹽水或無血清培養液洗2-3遍（如血清中的蛋白沒有干擾，也可以不洗）。按6孔板每孔加入100-200微升的比例加入WIP。用槍吹打數下，使WIP和細胞充分接觸。通常WIP接觸細胞數秒后細胞就會被裂解。

懸浮細胞，收集培養細胞，離心去除培養液，用PBS、生理鹽水或無血清培養液洗2-3遍（如血清中的蛋白沒有干擾，也可以不洗），用手指把細胞用力彈散，按6孔板每孔細胞加入100-200微升的比例加入WIP。如果細胞數量較大，應按50-100萬細胞/管分裝或根據細胞數量按比例增加WIP。用手指輕彈管底以促進WIP和細胞充分接觸，裂解*時應無明顯的細胞顆粒。

裂解物經10,000-14,000g離心3-5分鐘，取上清，即可進行后續的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

裂解液用量說明：通常6孔板每孔細胞加入100微升裂解液已經足夠，但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到150微升或200微升。

2．組織樣品

取Ep管，分別稱重標記，把組織切成小塊裝入Ep管中，稱重。按每20毫克組織加100-200微升的比例加入WIP（如裂解不*，可以適當增加WIP的用量；如需要的蛋白樣品濃度較高，可以適當減少WIP的用量）。用手握式電動組織細胞勻漿器勻漿約1分鐘或直至充分裂解。10,000-14,000g離心3-5分鐘，取上清，即可進行后續的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

如果組織樣品本身非常細小，如淋巴細胞，可直接加入WIP裂解，通過振蕩（Vortex）以使樣品裂解*